基因工程中重组质粒怎么形成

质粒在基因工程中的作用是作为什么~

质粒在基因工程中是作为载体送进受体细胞中去进行增殖和表达的工具。
质粒具有自主复制能力，使其在子代细胞中也能保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。细菌质粒是DNA重组技术中常用的载体。载体是指把一个有用的外源基因通过基因工程手段，送进受体细胞中去进行增殖和表达的工具。
将某种目标基因片段重组到质粒中，构成重组基因或重组体。然后将这种重组体经微生物学的转化技术，转入受体细胞(如大肠杆菌)中，使重组体中的目标基因在受体菌中得以繁殖或表达，从而改变寄主细胞原有的性状或产生新的物质。

扩展资料：
质粒的要求：
所有的质粒载体都有三个共同的特征：一个复制子、一个选择性标志和一个克隆位点。复制子是含有DNA复制起始位点的一段DNA（ori），也包括表达由质粒编码的复制必需的RNA和蛋白质的基因。选择性标志对于质粒在细胞内持续存在时必不可少的。
克隆位点是限制性内切酶切割位点，外源性DNA可由此插入质粒内，而且并不影响质粒的复制能力，或为宿主提供选择性表型。
参考资料来源：百度百科—质粒载体
参考资料来源：百度百科—质粒

基因工程中两个重组质粒为什么长度不一，这个可能就是生物连，因为每一个生物它可能都有不同的形状和大小。

在基因工程中，通常是把外源DN***断利用运载工具送入生物细胞。携带外源基因进入受体细胞的这种工具叫做载体(Vector)。

载体的本质是DNA。经过人工构建的载体，不但能与外源基因相连接，导入受体细胞，还能利用本身的调控系统，使外源基因在新细胞中复制以致功能的表达。目前，将外源基因运送到原核生物细胞的载体研究的较多，运送到植物和动物细胞中去的载体还处于探索阶段。本章以原核细胞载体为主，讨论各类载体的结构、功能以及构建过程。

在基因工程中所用的载体，主要有5类，

(1) 质粒(Plasmid)，主要指人工构建的质粒。

(2) 噬菌体的衍生物。

(3) cosmid(柯斯质粒)。

(4) 单链DNA噬菌体M13。

(5) 动物病毒。

各类载体的来源不同，在大小、结构、复制等方面的特性差别很大，但作为基因工程用的载体，以下三方面是它们共有的特性和基本要求： (1)在宿主细胞中能独立自主的复制，即本身是复制子。(2)容易从宿主细胞中分离纯化。(3)载体DNA分子中有一段不影响它们扩增的非必需区域，插在其中的外源基因可以象载体的正常组分一样进行复制和扩增。各类载体具有自己独特的生物学特性，可以根据基因工程的需要，有目的的选择合适的载体，为此，分别介绍各类载体。

一、质粒载体

质粒是一种裸露的，比病毒更简单的，有自主复制能力的DNA分子，是处于生命与非生命的分界线

(一) 质粒的一般生物学特性

质粒（plasmid)是染色体以外能自主复制的双链闭合环状DNA分子，它广泛存在于细菌细胞中。在霉菌、蓝藻、酵母和不少动植物细胞中也发现有质粒存在。目前对细菌质粒研究的较为深入，在基因工程中，多使用大肠杆菌质粒为载体。质粒分子的大小为1—200kb，质粒和病毒不同，它是裸露的DNA分子，没有外壳蛋白，在基因组中，也没有溶菌酶基因。质粒可以‘友好”的“借居”在宿主细胞中，也只有在宿主细胞中，质粒才能完成自己的复制。同时将其编码的一些非染色体控制的遗传性状进行表达，赋予宿主细胞各种有利的表型。

1．质粒的类型

在大肠杆菌中现已找到许多类型的质粒，其中对F质粒，R质粒和Col质粒研究的较为清楚。由于这些质粒的存在，寄主细胞获得了各自不同的性状特征。简介如下：

F质粒：又叫F因子或性质粒(sex plasmid)。 F因子是雄性决定因子，所以F+细胞又叫雄性细胞，与此相应的F—细胞则叫做雌性细胞。F+细胞的表面可以形成一种叫做性须(pilus)的结构，它促进雄性细胞同雌性细胞进行配对。在合适的条件下，将雄性细胞和雌性细胞混合培养，由于性须的作用，就会形成雌—雄细胞配对。我们称这种过程为细菌的接合作用(conjugation)。在雌雄细胞配对期间，雄性细胞中的F因子按滚环复制模式，经性须作用进入到雌性细胞。配对之后F—受体细胞获得了F因子，也变成为F+细胞。

F因子不但能够通过接合作用实现自我转移，而且还能够带动寄主染色体一道转移。由F因子整合到染色体而成的Hfr细胞（高频重组细胞），就有可能引发寄主染色体发生高频转移。但F因子的这种整合作用是一种可逆的过程，因此在一定的条件下，Hfr细胞又可重新变成F+或F细胞。

R质粒：也称抗药性因子。R质粒编码一种或数种抗菌素抗性基因，此种抗性通常能转移到缺乏该质粒的受体细胞，使后者也获得同样的抗菌素抗性能力

Col质粒：此类质粒编码有控制大肠杆菌素合成的基因，即所谓产生大肠杆菌素因子。大肠杆菌素是一种毒性蛋白，它可以使不带Col质粒的亲缘关系密切的细菌菌株致死。

根据质粒DNA中是否含有接合转移基因，可以分成两大类群:即接合型质粒和非接合型质粒。接合型质粒亦称自我转移的质粒，这类质粒除含有自我复制基因外，还带有一套控制细菌配对和质粒接合转移的基因，如F质粒，部分R质粒和部分Col质粒。非接合型质粒亦称不能自我转移的质粒，此类质粒能够自我复制，但不含转移基因组，因此这类质粒不能从一个细胞自我转移到另一个细胞。从基因工程的安全角度讲，非接合型质粒用作克隆载体更为合适。

2．质粒的复制类型

一种质粒在一个细胞中存在的数目，称为质粒的拷贝数。根据宿主细胞所含拷贝数的多少，可把质粒分成两种不同的复制型。一种是低拷贝数的质粒，称“严紧型”复制控制的质粒(stringent plasmid)，此类质粒每个宿主细胞仅含1～3份的拷贝。另一类是高拷贝数的“松弛型”复制控制的质粒(relaxed plasmid)，这类质粒每个宿主细胞可达到10～60份拷贝。

一种质粒究竟是属于严紧型还是松弛型并不是绝对的，这往往同宿主的状况有关。同一质粒在不同的宿主细胞中可能具有不同的复制型，这说明质粒的复制不仅受自身的制约，同时还受到宿主的控制。

在一般情况下，质粒的接合转移能力与复制型及分子大小间有一定的相关性。现归纳如下：

分子量大 分子量小

接合型质粒 拷贝数少 非接合型质粒 拷贝数多

严紧型复制 松弛型复制

3．质粒的不亲和性

在没有选择压力的情况下，两种亲缘关系密切的不同质粒，不能在同一宿主细胞中稳定地共存，这一现象称为质粒的不亲和性(plasmid incompatibility)，也称不相容性。例如colEI派生质粒，它们之间是互不相容的，也就是说，这些亲缘关系较近的不同质粒，当两种进入同一细胞后，必定有一种在细胞的增殖过程中，被逐渐排斥(稀释)掉。称这些质粒间是不相容的。

彼此不相容的质粒属于同一个不亲和群Gneompatiblity group)。而彼此能够共存的亲和质粒，则属于不同的不亲和群。大肠杆菌质粒现已鉴别出25个以上的不亲和群。它们之间是相容的，而同一个不亲和群内的质粒是不相容的。

(二) 质粒载体的基本条件

以上讨论的都是天然质粒，天然质粒的研究在理论上和遗传学等方面作出了贡献，但它很难直接作为基因工程的运载体应用。质粒载体绝大多数是以天然质粒为基础，人工改造和组建形成的实用载体。可根据不同的实验要求，加以选择。

作为理想的质粒载体，应具备以下几个条件：

(1) 能自主复制，即本身是复制子

(2) 具有一种或多种限制酶的单一切割位点，并在此位点中插入外源基因片段，不影响本身的复制功能；

(3) 在基因组中有1—2个筛选标记，为寄主细胞提供易于检测的表型特征。

(4) 分子量要小，多拷贝，易于操作。

二、 大肠杆菌质粒载体

1．pBR322质粒

质粒pBR322是经人工构建的一种较为理想的大肠杆菌质粒载体，亦是应用最为广泛的克隆载体，利用pBR322曾克隆到多种基因，虽然现在已有多种具有更优良特性的新型克隆载体逐渐代替了pBR322在基因克隆中地位，但pBR322仍是人工构建的具有几乎所有的理想特性的基因克隆载体之一。pBR322质粒是按照标准的质粒载体命名法则命名的。“p”表示它是一种质粒；而“BR”则是分别取自该质粒的两位主要构建者F．Bo1ivar和R．L．Rodriguez姓氏的头一个字母，“322'’系指实验室编号，以与其他质粒载体如pBR325，pBR327，pBR328等相区别。当然，“BR"恰好与“细菌抗药性”(bacterialresistance)两个词的第一个字母等同，所以有不少人认为pBR322中的"pBR"是“细菌抗药性质粒”的英文缩写。这显然是一种容易使人信以为真的猜想，而事实上只是一种有趣的巧合。

（1）pBR322质粒的结构

pBR322的图谱:

从pBR322质粒的构建过程，可以知道它是由三个不同来源的部分组成的，

第一部分来源于pSF2124质粒易位子Tn3的氨苄青霉素抗性基因（ampr）；

第二部分来源于pSC101质粒的四环素抗性基因（tetr）；

第三部分来源于ColE1的派生质粒pMB1的DNA复制起点（ori）。

（2）pBR322质粒载体的优点

pBR322质粒载体的第一个优点是具有较小的分子量。为了方便起见，大家统一规定pBR322质粒DNA分子核苷酸的计数从EcoRI限制酶的识别位点开始，并公认该序列…GAATTC…中的第一个T为核苷酸1(图4—23)，然后沿着从tetr基因到ampr基因按顺时针方向顺序计数。因此pBR322质粒DNA分子的正确长度是4 363bp。

pBR322质粒载体的第二个优点是，具有两种抗菌素抗性基因可供作挂化子的选择记号。现在已知总共有24种核酸内切限制酶对pBR322DNA分子都只具有单一的识别位点。其中有7种限制酶：EcoRV, NheI, BamHI, SphI, SalI, XmaIII和NruI，它们的识别位点是位于四环素抗性基因内部，另外有2种限制酶:ClaI和HindIII的识别位点是存在于这个基因的启动区内，在这9个限制位点上插入外源DNA都会导致tetr基因的失活；还有3种限制酶(ScaI、PvuI和PstI)在氨苄青霉素抗性基因（ampr）内具有单一的识别位点，在这个位点插入外源DNA则会导致ampr基因的失活。这种因DNA插入而导致基因失活的现象，称之为插入失活效应。

质粒DNA编码的抗菌素抗性基因的插入失活效应，是检测重组体质粒的一种十分有用的方法。例如，将外源DN***段克隆在pBR322质粒的BamHI或SalI位点上，由于阻断了tetr基因编码序列的连续性，而使其失去活性，结果便产生出了具有AmprTetr表型的重组的pBR322质粒。将这样的重组质粒转化给野生型(AmpSTetr)的大肠杆菌细胞，并涂布在含有氨苄青霉素的选择性培养基平板上。那么存活下来的菌落都将具有Ampr的表型，因此它们也必定是获得了编码有这种抗性基因的质粒的转化子克隆。但在这些Ampr表型的转化子克隆中，有一部分具有Tetr表型，另一部分具有Tets的表型。只要将它们涂布在含四环素的选择性培养基平板上，就可以迅速地辨别出它们到底属于什么表型。因为在tetr基因内没有插入外源DN***段的pBR322质粒，其tetr基因是有活性的，由它转化来的Ampr转化子菌落就应该是Tetr的表型，所以AmprTets表型的细胞所携带的pBR322，必定是在其tetr基因上插入了外源DNA的pBR322派生的重组质粒。

pBR322质粒载体的第三个优点是，具较高的拷贝数，而且经过氯霉素扩增之后，每个细胞中可累积1000～3000个拷贝。这就为重组体DNA的制备提供了极大的方便。

2．pUC质粒载体

pUC载体是在pBR322质粒载体的基础上，组入了一个在其5，—端带有一段多克隆位点的lacZ'基因，而发展成为具有双功能检测特性的新型质粒载体系列。

(1) pUC质粒载体的结构

此类质粒载体之所以取名为pUC，是因为它是由美国加利福尼亚大学University of California的科学家J．Messing和J．Vieria于1987年首先构建的。

一种典型的pUC系列的质粒载体，包括如下四个组成部分：

（a）来自pBR322质粒的复制起点(ori)；

（b）氨苄青霉素抗性基因(ampr)，但它的DNA核苷酸序列已经发生了变化，不再含有原来的核酸内切限制酶的单识别位点；

(c) 大肠杆菌β—半乳糖酶基因（lacZ）的启动子及其编码α—肽链的DNA序列，此结构特称为lacZ'基因；

（d）位于lacZ'基因中的靠近5”端的一段多克隆位点(MCS ，multiple cloning sites)区，但它并不破坏该基因的功能(图)。(2)pUC质粒载体的优点

与pBR322质粒载体相比，pUC质粒载体系列具有许多方面的优越性，是目前基因工程研究中最通用的大肠杆菌克隆载体之一。其优点概括起来有如下三个方面：

第一、 具有更小的分子量和更高的拷贝数

在pBR322基础上构建pUC质粒载体时，仅保留下其中的氨苄青霉素抗性基因及复制起点，使其分子大小相应地缩小了许多，如pUC8为2 750bp，pUCl8为2 686bp。同时，由于偶然的原因，在操作过程中使pBR322质粒的复制起点内部发生了自发的突变，导致rop基因的缺失。由于该基因编码的共63个氨基酸组成的Rop蛋白质，是控制质粒复制的特殊因子，因此它的缺失使得pUC质粒的拷贝数比带有pMBl或ColEl复制起点的质粒载体都要高得多，平均每个细胞即可达500～700个拷贝。所以由pUC质粒重组体转化的大肠杆菌细胞，可获得高产量的克隆DNA分子。

第二，适用于组织化学方法检测重组体

pUC质粒结构中具有来自大肠杆菌lac操纵子的lacZ，基因，在这个基因的编码区中插入了一个多克隆位点。lacZ，基因所编码的α—肽链（编码β—半乳糖酶基因的氨基末端）可参与α—互补作用。这种载体适合于可编码β—半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。虽然质粒和宿主编码的片段各自均无活性，但它们共处一个细胞中时可融为一体，形成具有酶学活性的蛋白质。这样，LacZ基因上缺失近操纵基因区段的突变株与带有完整近操纵基因区段的β—半乳糖苷酶阴性的不同突变株之间实现互补，这种互补现象叫做α—互补。由α—互补而产生的Lac+细菌易于识别，在诱导物异丙基—β—D—硫代半乳糖苷(IPTG)存在时，它们在含有生色底物5—溴—4—氯—3—吲哚—β—D—半乳糖苷(X-gal)的平板上形成蓝色的菌落。当多克隆位点中插入外源DN***段时，互补作用遭到破坏，在含有IPTG和X-gal平板上将出现白色菌落。利用“α—互补”进行重组子的筛选比利用“插入失活”法更加方便。应用pBR322质粒作克隆载体，其重组体转化子克隆的选择则需经过两个步骤，即还需从头一种抗性平板转移到另一种抗性平板。由此可见，使用pUC质粒载体进行基因克隆要比pBR322节省时间。

第三，具有多克隆位点MCS区

pUC质粒载体具有与M13mp8噬菌体载体相同的多克隆位点，它可以在这两类载体系列之间来回“穿梭”。因此，克隆在MCS当中的外源DN***段，可以方便地从pUC质粒载体转移到M13mp8载体上，进行克隆序列的核苷酸测序工作。同时，也正是由于具有MCS序列，可以使具两种不同粘性末端(如EcoRI和BamHI的外源DN***段，无需借助其它操作而直接克隆到pUC质粒载体上。

3. pGEM系列载体

pGEM系列载体是一种与pUC系列十分类似的小分子的质粒载体。在其总长度为2 743bp的基因组DNA中，编码有一个氨苄青霉素抗性基因和一个lacZ'基因。在后者还插入了一段含多个限制性内切酶的识别序列的多克隆位点。此序列结构几乎与pUC克隆载体的完全一样。

pGEM系列载体与pUC系列之间主要差别是，它具有两个来自噬菌体的启动子，即T7启动子和SP6启动子，它们为RNA聚合酶的附着作用提供了特异性的识别位点。由于这两个启动子分别位于lacZ'基因中多克隆位点区的两侧(见图)，故若在反应试管中加入纯化的T7或SP6RNA聚合酶，那么克隆的外源基因便会转录出相应的mRNA。

三、λ噬菌体载体

l．λ噬菌体的一般生物学特性

λ噬菌体为线形双链DNA分子，长度约为49kb，在λDNA分子两端各有12个碱基的单链互补粘性末端，当λ噬菌体进入细菌细胞后，其DNA可迅速通过粘性末端配对而成双链环状DNA分子，这种由粘性末端结合形成的双链区域称为cos位点。

λ噬菌体是一个温和噬菌体，其生活周期有二种不同的类型，即裂解周期和溶源性周期。在裂解周期中，λ噬菌体的DNA分子一旦注入寄主细胞中，便可借助于寄主的复制和转录系统的功能，使自身DNA大量复制同时合成大量的外壳蛋白，并组装成大量(约100个)完整的噬菌体颗粒，最后，使宿主裂解并从细胞中释放出来。

在溶源周期中，λ噬菌体的DNA分子进入宿主后并不马上复制，而是在特定的位点整合到宿主染色体DNA中，与宿主染色体形成一体，并随宿主染色体的复制而复制，随宿主的分裂繁殖传给其子代细胞。

λDNA至少包括61个基因，除少数例外，大多数编码基因均是按功能的相似性成簇排列。值得注意的是，在入λDNA分子中从J基因到N基因之间，大约占λDNA总长度三分之一的区段对于λ噬菌体的裂解周期而言是非必需的。这一区段的缺失或在此段插入外源DN***段，将不影响入噬菌体的增殖。这就是λ噬菌体可作为基因工程载体的一个重要的依据。

2．λ噬菌体载体

（1）改造

野生型的λ噬菌体不适于直接用作基因克隆的载体。主要原因有二：

①λDNA基因组大而且复杂，特别是其中具有许多基因克隆常用的限制酶识别位点(如5个BamHI位点、6个BglⅡ位点和5个EcoRI位点等)；

②λ噬菌体外壳只能接纳一定长度(即相当于入基因组大小的75％～105％)的DNA分子。因此，λDNA只能作为小片段外源DNA分子(即2．5kb左右)的克隆载体。这一克隆容量显然不能满足大多数基因克隆工作的要求，必须对野生型λDNA进行改造。

扩充λDNA载体的克隆容量是改造λDNA的首要目标；此外改造工作还包括：①除去裂解周期所必需的基因区域中的限制酶识别位点，在非必需区引入合适的限性酶位点；②引入适当的选择性标记以方便重组子的筛选；⑧通过在某些必需基因中引入无义突变使之成为安全载体，以利于生物学防护等。

（2）载体类型：

只具有一个限制酶位点可便于外源DNA插入的称为插入型载体，含有二个限制酶切点，在两个位点之间的DNA区段可以被外源DN***段所取代的载体称为取代型载体。

随着体外包装技术和寡聚核苷酸合成技术的发展，人们已经构建了许多带有多克隆位点的λ噬菌体载体，现在常规使用的λ噬菌体载体，不少既可用作插入型又可用作置换型。总之，多克隆位点的引入不仅极大地扩展了λ噬菌体的克隆范围，同时还大大地简化了其操作技术。

（3）重组体的筛选

λ噬菌体是利用插入失活或噬菌斑形成的原理筛选重组体的。常用的插入失活方法有大肠杆菌β—半乳糖苷酶失活和免疫功能失活两种。

利用β—半乳糖苷酶插入失活的载体(如λgt ll、λgt l8—23等)，在生色底物(X—gal)和诱导物(1PTG)存在时，与相应的Lac—宿主铺平板可形成深蓝色噬菌斑。用这种载体进行克隆时，β—半乳糖苷酶基因的大部分被外源DN***段取代，所产生的重组噬菌体丧失α—互补能力，在含有X-gal和IPTG的平板下形成无色噬菌斑。因此，对于这类入噬菌体载体，可通过组织化学方法进行重组子的筛选。

在免疫功能插入失活型载体的基因组中与免疫功能有关的DNA区段中含有一、二种限制酶的单一切点，当外源DN***段由这些位点插入时，就会使载体所具有的合成活性阻遏物的功能遭到破坏，而无法进入溶源周期。因此，凡带有外源DN***段的重组体只能形成清晰的噬菌斑，而没有外源DNA插入的亲本则形成混浊的噬菌斑，不同的噬菌斑形态可作为筛选重组体的标志。这种类型的载体中的λgtl0最为常用。

3．λ噬菌体载体的应用

λ噬菌体作为克隆载体主要用于：

（1）基因组DNA文库的构建；

（2）cDNA文库的构建

（3）大容量载体(如粘粒等)中增殖的大片段外源DNA序列的亚克隆等。

四、 粘粒载体（柯斯质粒载体）

1．柯斯质粒载体的构建

λ噬菌体克隆外源DNA的能力，虽说其理论上的极限值可达23kb，但事实上较为有效的克隆范围仅为15kb左右。当然，在一般的情况下，这样大小的DN***段已足够容纳一个完整的基因及其两端的侧翼序列(flankingsequence)。然而，大量的研究资料表明，许多基因的分子大小比正常预期的要大得多，有的可达35～40kb甚至更大。同时，应用λ噬菌体作载体，还往往不能够同时克隆两个连锁的基因。不言而喻，在实际的研究工作中，特别是有关真核基因的结构与功能的研究，需要比λ噬菌体载体具有更大克隆能力的新型的载体。1978年，J．Collins及B．Hohn等人发展出的柯斯质粒载体(eosmidvectors)满足了这样的需要。

“cosmid”一词是由英文“cos site-carrying plasmid"缩写而成的，其原意是指带有粘性末端位点(cos)的质粒。因此我们说，所谓柯斯质粒，乃是一类由人工构建的含有且DNA的COS序列和质粒复制子的特殊类型的质粒载体。它们兼具有λ噬菌体的高效感染能力和质粒易于克隆选择的优点，既能像质粒一样在寄主细胞内复制，也能像λDNA一样被包装到噬菌体颗粒中去。其克隆能力为31—45kb，而且能够被包装成为具有感染性能的噬菌体颗粒。

2．柯斯质粒载体的特点

目前已经在基因克隆通用的质粒载体的基础上，发展出了许多不同类型的柯斯质粒载体，柯斯载体的特点大体上可归纳成如下三个方面：

第一，具有λ噬菌体的特性。柯斯质粒载体在克隆了合适长度的外源DNA，并在体外被包装成噬菌体颗粒之后，可以高效地转导对立噬菌体敏感的大肠杆菌寄主细胞。进入寄主细胞之后的柯斯质粒DNA分子，便按照λ噬菌体DNA同样的方式环化起来。但由于柯斯质粒载体并不含有且噬菌体的全部必要基因，因此它不能够通过溶菌周期，无法形成子代噬菌体颗粒。

第二，具有质粒载体的特性。柯斯质粒载体具有质粒复制子，因此在寄主细胞内能够像质粒DNA一样进行复制，并且在氯霉素作用下，同样也会获得进一步的扩增。此外，柯斯质粒载体通常也都具有抗菌素抗性基因，可供作重组体分子表型选择标记，其中有一些还带上基因插入失活的克隆位点。例如，在pHC79柯斯质粒基因组的PstI限制位点克隆，会导致ampr基因的失活；在BamHI和SalI限制位点克隆，又会造成tetr基因的失活。

第三，具有高容量的克隆能力。正如上面所述，柯斯质粒载体的分子仅具有一个复制起点，一两个选择记号和COS位点等三个组成部分，其分子量较小，一般只有5～7kb左右。因此，可以插入到柯斯质粒载体上并能被包装成立噬菌体颗粒的最大外源DN***段，即柯斯质粒载体的克隆极限可达45kb左右。这个数字比且噬菌体载体及质粒载体的最大克隆能力都要大得多。同时，由于包装限制的缘故，柯斯质粒载体的克隆能力还存在着一个最低极限值。如果用作克隆载体的柯斯质粒的分子为5kb，那么插入的外源DN***段至少得有30kb长，才能包装形成具感染性的且噬菌体颗粒。由此可见，柯斯质粒克隆体系用于克隆大片段的DNA分子特别有效。

目前，已有多种柯斯质粒载体可用于基因克隆，图所示为最常用的柯斯质粒载体之一pJB8。

粘粒载体功能与λ噬菌体类似，但由于λ噬菌体具有较大的多功能性和较高的克隆效率，仍然是目前构建基因文库时首选的克隆载体，粘粒载体只有在以下两种特定的情况下使用：①在单个重组体中克隆和增殖完整的真核基因；②克隆与分析组成某一基因家族的真核DNA区段，即当载体克隆容量大具有明显优势时使用粘粒载体。

我查的

质粒是目的基因的运载体
在用鸟枪法或人工合成法提取目的基因后
用限制性内切酶将质粒切开，使目的基因与切开的质粒具有相同的粘性末端
他们的碱基恰好配对，氢键自动结合
再用DNA连接酶将切口补上
重组质粒就形成了。

原先的质粒可看作是一个环 现在环上用限制酶切一刀 将目的基因插入 目的基因两端再用DNA分子连接酶与原先质粒环上的切口的粘性末端连接上 重组质粒就形成了

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