基因表达载体和重组质粒的区别

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真核生物中分离到的完整的基因片段与表达载体构成的重组质粒转化入大肠杆菌后,不能获得表达的原因?~

大肠杆菌为原核生物,原核生物的基因序列中不含有内含子,也就没有内含子的剪切机制,而真核生物中获得的完整的基因片段中一定是含有内含子的,(mRNA中不含)所以,在表达上会有差异。

一般情况下,我们会用同一种限制酶分别切割目的基因和质粒,使其拥有相同的黏性末端,然后再用同一种DNA连接酶使其结合在一起。
本题中想考察的是在这个过程中可能存在的一种错误情况,因为我们假如用同一种限制酶切割的话,我们是期待目的基因和质粒的粘性末端在连接酶的作用下能连接在一起从而形成重组质粒,但是由于目的基因两端的粘性末端碱基彼此互补、质粒两侧的粘性末端也彼此互补,在对应的连接酶的作用下它们有可能自身发生环化,形成两个环状的DNA而不是一个重组质粒,因此我们最好的方法是用两种不同的限制酶分别切割目的基因和质粒的两侧,使它们各自的两端彼此不互补,那么再用连接酶连接的时候,就不会出现自身环化的情况,而是按我们计划的那样去构建重组质粒了。
你明白了吗?

一、构成不同

基因表达载体:构成包括启动子、终止子、标记基因、目的基因。

重组质粒:构成包括目的基因片段、质粒、酶。

二、对象不同

基因表达载体:基因表达载体的对象通常是活细胞。

重组质粒:重组质粒的对象通常是细菌。

三、原理不同

基因表达载体:将不同来源的基因在体外构建杂种DNA分子,然后导入活细胞。

重组质粒:用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段, 在体外使两者相连接, 得到重组质粒。


扩展资料

一、基因表达载体分为两大类:

1、病毒载体

病毒载体主要包括慢病毒、腺病毒、逆转录病毒、腺相关病毒等。

2、非病毒载体

非病毒载体主要包括裸露DNA、脂质体、纳米载体等。

二、基因表达载体的过程

过程包括:过表达质粒选择、目的基因获取、引物设计、过表达质粒构建。在进行基因过表达过程中,可以选择不同的过表达载体。过表达载体与克隆载体比较而言,加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。

参考资料来源:百度百科-基因表达载体

百度百科-重组质粒



基因表达载体的构建(即目的基因与运载体结合)是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心。
  将目的基因与运载体结合的过程,实际上是不同来源的DNA重新组合的过程。如果以质粒作为运载体,
  首先要用一定的限制酶切割质粒,使质粒出现一个缺口,露出黏性末端。然后用同一种限制酶切断目的基因,使其产生相同的黏性末端(部分限制性内切酶可切割出平末端,拥有相同效果)。将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处,首先碱基互补配对结合,两个黏性末端吻合在一起,碱基之间形成氢键,再加入适量DNA连接酶,催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键,从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来,形成一个重组DNA分子。这个重组的DNA分子也叫重组质粒。
就是这样。简单的说,重组质粒是基因表达载体的一种。

很大的区别。


基因表达载体和重组质粒的区别视频

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