洋葱根尖的取材及解离步骤是怎样的?

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解离漂洗染色制片步骤如下:

1、取材:课前,将洋葱放在装满水的广口瓶上,底部接触水,装置放在温暖环境中,待根长至1-5cm。注意培养基应经常换水,目的是防止烂根(乙醇发酵)。在上午10点——下午2点左右(分生区细胞分裂旺盛),切取其根尖(带有分生区)2-3mm。

    

2、解离:解离液为盐酸,时间为10——15min

目的是使组织细胞相互分离开。

(细胞壁由纤维素和果胶构成)

解离时间过长,染色体被破坏。

解离时间过短,组织细胞解离不充分,不能相互分离。

此时通过解离已将细胞杀死,使细胞停留在不同的分裂时期,不会再发生变化而保持原来形态。由于看不到细胞的动态变化,故不可移动装片在视野周围寻找细胞的不同分裂期。

3、漂洗:漂洗液为水,时间为10min

目的是洗去盐酸以防解离过度和便于染色。

     

4、染色:染色液为龙胆紫或醋酸洋红溶液(pH<7,但为有色阳离子碱性染料)

目的是使染色体着色。

染色时间过长——太深,无法观察。

染色时间过短——太浅,不易观察。

5、制片:染色结束后盖上盖玻片,用拇指轻压盖玻片使细胞分散开。

   

6、观察:先低倍镜观察——找到根尖分生区。

再高倍镜观察——找到各时期的细胞。




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